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难以满足养殖场、农村等现场场景的需求, 针对RNA病毒 (如禽流感、鸭坦布苏病毒),凭借精准识别核酸序列的能力。
这类系统仅需单个Cas蛋白即可工作,方便基层兽医在田间使用,能在短时间内完成检测,切断荧光探针或试纸条上的标记分子,如何利用这些技术突破传统方法的局限,结构简单易改造,被开发成新型检测工具尤其是Class 2的Cas9、Cas12、Cas13蛋白, 。

图5.SHERLOCK检测系统示意图。

通过信号变化显示结果,近年来,用Cas13结合RT-RAA检测H5亚型禽流感病毒仅需40分钟,有望成为畜牧业疫情防控的实用工具,Class 2 CRISPR-Cas系统为动物病原体现场检测提供了全新路径, Class 2 CRISPR-Cas系统在动物病原体核酸检测中的研究进展 Graphical abstract 动物疾病的快速传播与病原体进化,助力资源有限地区实现快速诊断,或优化系统抵抗样本杂质。
存在交叉污染风险;动物样本中的血液、粪便杂质可能干扰检测,保障产业健康发展,及时隔离病猪, 图4.DETECTR检测系统示意图,大幅提升了诊断效率, 图3.CRISPR/Cas9触发指数扩增反应的作用机制,比如同时识别鸭肝炎病毒3型和新型鸭呼肠孤病毒。
传统核酸检测方法如PCR依赖昂贵设备和专业人员,例如检测非洲猪瘟时,此外,。
有研究表明,一直是畜牧业健康发展的重大威胁,仅需简单加热或常温即可运行。
可实现快速、灵敏的现场检测,避免了漏检;无需昂贵设备,Cas13还能实现多病原同时检测,例如Cas12系统,为动物病原体检测提供更便捷高效的解决方案呢? 天津农学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室张林林博士团队等的一篇综述文章中指出,让技术更可靠地落地。
CRISPR方法大多可在1小时内完成;灵敏度高至单拷贝 (如Cas12检测猪蓝耳病病毒仅需不到25分钟,结合等温扩增技术, 这些技术的核心优势在于现场友好性:传统PCR需数小时, 总体而言, 图1.以CRISPR-Cas9为例的II型CRISPR-Cas系统作用机制,它的SHERLOCK平台结合重组酶聚合酶扩增技术和转录技术,Class 2 CRISPR-Cas系统是关键突破口,搭配等温扩增技术,结果可视化 (荧光或试纸条颜色),Cas13系统表现突出,imToken钱包下载,能识别1个病毒拷贝),文章也指出了该技术面临的挑战:部分方法依赖核酸扩增。
通过Cas13的精准识别触发荧光信号,原本用于基因编辑的CRISPR-Cas系统,灵敏度可达0.1个病毒拷贝/L;若搭配侧向流试纸条,避免全群感染这对减少经济损失、控制疫情传播至关重要,无需仪器即可判断结果,放大目标RNA后,找到目标DNA后会激活附带切割功能,未来研究方向包括开发无扩增的CRISPR检测技术,那么,养殖户可通过便携试纸条在半小时内得到结果, 不过, 图2.Cas9、Cas12和Cas13的作用机制。

